اثر پروتئین غیر ساختاری شماره ی 4(nsp4) روتا ویروس در بازآرایی فیلامنت های بینابینی سلولی بوسیله مسیر کلسیم کالمودیولین کیناز

پروتئین غیر ساختاری شماره ی 4(nsp4) سبب افزایش در غلظت داخل سلولی کلسیم سیتوپلاسمی از مسیر های وابسته به فسفو لیپاز c و مسیرهای غیر وابسته در سلول های آلوده به روتا ویروس می شود. بنظر می رسد که افزایش غلظت کلسیم ستوپلاسمی در سلول های آلوده به روتا ویروس ناشی از پروتئین غیر ساختاری شماره ی4(nsp4) برای تخریب شبکه اسکلت سلولی ضروری باشد. افزایش غلظت کلسیم سیتوپلاسمی می تواند سبب فعال شدن خانواده پروتئین کیناز های سلول میزبان ، مانند کلسیم کالمودیولین کیناز ii شود که نقش حیاتی را در پاتوژنز و تکثیر ویروسی بازی می کند. هدف از این مطالعه بررسی فعالیت کلسیم کالمودیولین کیناز ii و بررسی بازآرایی فیلامنت بینابینی وایمنتین در سلول های آلوده به روتاویروس یا سلول های ترانسفکت شده با سازه بیانی حاوی nsp4 بود. در این مطالعه برای تکثیر روتاویروس و ایجاد ویروس استوک از سلول ma104 استفاده شد. پس از انجام pcr و تکثیر ژن nsp4، محصول pcr ژن nsp4 درون وکتور‎ بیانی مورد نظر کلون شد. پس از تایید توالی یابی پلاسمید pcdna3.1+/ nsp4 ، پلاسمید نوترکیب جهت تولید پروتئ?ن نوترکیب nsp4 در سلول های hek293t و ma104 ترانسفکت گردید. نتایج وسترن بلات نشان داد که nsp4 سبب اتو فسفوریلاسیون کلسیم کالمودیولین کیناز ii از طریق افزایش غلظت کلسیم سیتوپلاسمی و سپس بازآرایی فیلامنت بینابینی وایمنتین می شود. نتایج حاصل نشان می داد که فعالیت وایروپورینی پروتئین غیر ساختاری شماره 4 روتاویروس گاوی سبب شروع فسفوریلاسیون فیلامنت بینابینی وایمنتین بوسیله کلسیم کالمودیولین کیناز ii و تبدیل اشکال شعاعی وایمنتین به ساختارهای قفس مانند می شود. مطالعات نشان می دهد که افزایش غلظت کلسیم سیتوپلاسمی ناشی از nsp4 می تواند سبب فعال شدن آنزیم های حساس به کلسیم در مسیرهای پیام دهی کلسیم شود، که یکی از این پروتئ?ن ها کلسیم کالمودیولین کیناز ii است که نقش حیاتی را در پاتوژنز و تکثیر ویروسی بازی می کند. نتایج این مطالعه پیشنهاد می کند که شروع بازآرایی فیلامنت بینابینی وایمنتین بوسیله کلسیم کالمودیولین کیناز ii می تواند از دیدگاه پاتوژنز روتاویروس حائز اهمیت باشد. از طرفی کاندید بسیار جذاب در طراحی داروهای ضد ویروسی و یا مدیریت بیماری های ویروسی محسوب می شود.